Secuenciación directa en Hipotiroidismo central congénito 

La Secuenciación directa se la realizó para la identificación de 2 cambios de nucleótidos, en los limites exón/intrón del gen de la hormona estimulante de la tiroides beta (TSHB), el primero c. 40A>G y el otro c.94G>A en el codón 32 del exón 2, este ultimo causante de hipotiroidismo central congénito. Esta técnica se la utiliza para secuenciar regiones especificas codificantes de ADN, previo a esto se utiliza PCR para amplificar esas regiones, Los productos de PCR específicos purificados se secuenciaron directamente usando un kit comercial para ello se extrajo ADN genómico de leucocitos de sangre periférica.

Bibliografia 

1. Özhan B, Boz Anlaş Ö, Sarıkepe B, Albuz B, Semerci Gündüz N. Congenital Central Hypothyroidism Caused by a Novel Thyroid-Stimulating Hormone-Beta Subunit Gene Mutation in Two Siblings. Journal of Clinical Research in Pediatric Endocrinology [Internet]. 2017 Sep 1 [cited 2021 Jan 31];9(3):278–82. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5596811/

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 qRT‐PCR en Hipotiroidismo Congénito 

PCR cuantitativa en tiempo real con transcripción inversa o qRT‐PCR se la realizó para identificar el impacto de las mutaciones en el Gen THRB codificante del receptor TR-beta el cual esta relacionado con disgenesia tiroidea. Se extrajo el ARNm de las cel. epiteliales foliculares de tiroides usando el reactivo TRIzol. Se utiliza  ARNm para la síntesis de ADN complementario con transcriptasa inversa. El ADNc se amplificó mediante qRT‐PCR y los cebadores correspondientes. El análisis de la curva de fusión de los productos de amplificación se realiza al final de cada PCR para confirmar que solo se amplificó y detectó un producto de PCR.

Bibliografía: 

1.Zhou Z, Yang C, Lv F, Liu W, Yan S, Zang H, et al. Novel THRB mutation analysis in congenital hypothyroidism with thyroid dysgenesis. Journal of Cellular Biochemistry [Internet]. 2018 Aug 3 [cited 2021 Jan 25];119(11):9474–82. Available from: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/jcb.27264

https://uceedu-my.sharepoint.com/:b:/g/personal/amnaranjol_uce_edu_ec/EUefo279CAJBumr6fpnetHcB8Ol26FNSpwhN3vEdRijmcg?e=5d6NbD

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Alteraciones de la Epigenómica en hipotiroidismo  

Las hormonas tiroideas (T3-T4) de origen materno son indispensables durante el desarrollo del cerebro. Cuando se presenta hipotiroidismo en la gestante afecta al desarrollo neocortical embrionario y resultan manifestaciones clínicas irreversibles, este déficit  de hormonas afecta a la maduración de los astrocitos determinado por la proteína acida fibrilar glial (Gfap). Se evidencia silenciamiento epigenético de Gfap en insuficiencia de hormonas tiroideas, con el aumento de la metilación del ADN junto con la disminución de la acetilación de histonas en el promotor de Gfap conduce a la supresión de la expresión de Gfap.

  

Bibliografía 

1. Kumar P, Godbole NM, Chaturvedi CP, Singh R, George N, Upadhyay A, et al. Mechanisms involved in epigenetic down-regulation of Gfap under maternal hypothyroidism. Biochemical and Biophysical Research Communications [Internet]. 2018 Jul [cited 2021 Jan 17];502(3):375–81. Available from: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0006291X18312506

https://uceedu-my.sharepoint.com/:f:/g/personal/amnaranjol_uce_edu_ec/Ep0yUSI_PhlHr5ryXI84YsQBno9yvQ9Jsx6C3vyPyeD4Sg?e=hi548r

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 Alteraciones de la traducción en Hipotiroidismo 

El gen TPO que codifica la enzima tiroperoxidasa que cataliza la organificación del yodo a la tiroglobulina clave en la síntesis de las hormonas tiroideas. En algunas familias presentaron mutaciones en este gen en homocigosis en el exón 8, ocurriendo un cambio de A por G en la posición de nucleótidos, provocando de esta manera errores durante el proceso de traducción resultando en un cambio de aminoácido de asparagina a serina en el codón 425, esta mutación causa dishormonogénesis dando así hipotiroidismo congénito. Los defectos en TPO se heredan comúnmente de manera autosómica recesiva. 

Bibliografía: 

1.Funez Rios A. El hipotiroidismo congénito en Nicaragua: evaluación del programa de cribado neonatal de la enfermedad (2005-2015), su etiología genética y la influencia ambiental por deficiencia de yodo. Repositorio uam [Internet]. 2017 [cited 2021 Jan 10]; Available from: https://repositorio.uam.es/handle/10486/681807

 Alteraciones de la transcripción en hipotiroidismo 

Los factores de transcripción son importantes en el proceso de transcripción ya que pueden activar o regular. En el caso del hipotiroidismo congénito, se necesita de la expresión simultanea de los factores de transcripción  TTF-1, TTF-2 y PAX8 en el tejido tiroideo para su desarrollo y funcionalidad, en un caso contrario a esto originaria una disgenesia tiroidea, las mutaciones que presenta TTF-2 conduce a producir una proteína mutante con alteración en la unión a ADN y perdida de la función transcripcional, mutaciones en PAX8 dan lugar a una alteración en la unión al ADN y perdida de la actividad transcripcional.

Bibliografía.

1.Rodriguez K, Rodriguez J, Reyes J, Romero L, Romero G, Rios M. Hipotiroidismo congénito: factores de transcripción y calidad de vida. Revista Médica de Trujillo [Internet]. 2018 [cited 2021 Jan 2];13(1). Available from: https://revistas.unitru.edu.pe/index.php/RMT/article/view/1756

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